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細(xì)胞因子溶解注意事項(xiàng)

發(fā)布時(shí)間: 2023-10-17  點(diǎn)擊次數(shù): 1412次
重組細(xì)胞因子溶解注意事項(xiàng)
 
1.離心(Centrifuge):高速離心 (10, 000 rpm) 20-30 秒,或低速離心 (2, 000 rpm) 5 分鐘。
 
2.溶解(Reconstitution):用去離子水或其它緩沖液(根據(jù)說(shuō)明書要求進(jìn)行選擇)溶解至說(shuō)明書要求的濃度 (一般為 0.1-1.0 mg/ml)。溶解時(shí)不可振蕩,避免因化學(xué)鍵的斷裂造成蛋白失活,可加入適當(dāng)?shù)娜軇┹p搖并靜置一段時(shí)間,待細(xì)胞因子全部溶解后使用。溶劑的選擇: 
1)要求用去離子水溶解的產(chǎn)品,務(wù)必不可用鹽溶液,避免過(guò)高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出; 
2) 要求用鹽溶液溶解的產(chǎn)品,請(qǐng)依照說(shuō)明書上的濃度,同樣也是為了避免過(guò)高的鹽濃度。
 
3.分裝和貯存(Aliquot and Storage):蛋白溶解后可根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)一步稀釋成工作液,稀釋可用RPMI 1640、DMEM 或PBS 等溶液。工作液在4℃可保存1 周,如需長(zhǎng)期保存,最好在稀釋液中加入10%的FCS(小?;蛱ヅQ澹┗?.1 %的BSA(牛血清白蛋白)或5% HAS(人血清白蛋白)來(lái)穩(wěn)定蛋白,然后需分裝凍存于-20℃ (注意:不可凍存于-50℃以下)。分裝時(shí)每管中工作液的體積最好是一次實(shí)驗(yàn)的用量,以實(shí)現(xiàn)每次實(shí)驗(yàn)用完一支工作液,避免反復(fù)凍融引起蛋白活性的降低。
 
細(xì)胞因子量極微,所以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)牟僮魇潜匦璧模魏尾贿m當(dāng)?shù)娜芙舛紩?huì)造成實(shí)驗(yàn)的失敗,

 

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